Dom ProduktyRekokinaza rekombinowana

Zestaw REK ELISA

Zestaw REK ELISA

    • REK ELISA Kit
  • REK ELISA Kit

    Szczegóły Produktu:

    Miejsce pochodzenia: Chiny, Szanghaj
    Nazwa handlowa: YAXINBIO
    Orzecznictwo: NSF ISO 9001:2015
    Numer modelu: K03-REK

    Zapłata:

    Minimalne zamówienie: 1
    Cena: 2000 RMB
    Szczegóły pakowania: opakowanie na lód, karton
    Zasady płatności: T / T
    Kontakt
    Szczegółowy opis produktu
    Wrażliwość:: ≤ 1 ng / ml Zasięg wykrywania:: 0,25-16 ng / ml
    Okres ważności:: 6 miesięcy Czas operacyjny:: Wykwalifikowani eksperymentatorzy mogą przeprowadzić oznaczenie w 2,5 godziny.
    High Light:

    Recombinant Enterokinase ELISA Kit

    ,

    1ng/Ml Recombinant Enzymes

    Zestaw REK ELISA

    1. przeznaczenie

    Ten zestaw ELISA jest przeznaczony do stosowania w oznaczaniu ilościowym enterokinazy, rekombinowanej z trzustki bydlęcej.Zestaw jest przeznaczony wyłącznie do użytku badawczego i nie jest przeznaczony do użytku diagnostycznego u ludzi ani zwierząt.

     

    2. Podstawowe parametry zestawu ELISA

    Czułość ≤ 1 ng / ml

    Zakres wykrywania: 0,25 -16 ng / ml

    Swoistość: Rekombinowaną enterokinazę bydlęcą można wykryć bez znaczącej reaktywności krzyżowej z innymi białkami związanymi z rekombinowanym systemem ekspresji bakterii z grupy coli.

    Powtarzalność: współczynniki zmienności między płytami i na jednej płycie są mniejsze niż 10%

    Czas działania: wykwalifikowani eksperymentatorzy mogą wykonać oznaczenie w 2,5 godziny.

    Okres przydatności do spożycia: 6 miesięcy

     

    3. Skład i przechowywanie zestawu

     

    Nieotwarte zestawy można przechowywać w temperaturze 2–8 ° C przez tydzień.Jeśli zestaw będzie używany po tygodniu, należy go zdemontować i przechowywać każdy element osobno zgodnie z warunkami w poniższej tabeli.

     

    Wyjaśnienie:

    1. Wszystkie zakrętki butelek z odczynnikami muszą być mocno zakręcone, aby zapobiec parowaniu i zanieczyszczeniu mikrobiologicznemu.

    2. Płytkę do mikromiareczkowania można przechowywać w temperaturze -20 ° C przez 6 miesięcy i nie przechowywać w temperaturze 2–8 ° C dłużej niż tydzień.

     

    Nazwa Specyfikacja Temperatura przechowywania
    Płytka MicroELISA (demontowalna) 8 otworów × 12 linii -20 ° C

    (A1)

    Norma odniesienia

    4 2-8 ° C

    (A2)

    Skoncentrowane wykrywanie HRP Ab

    1 × 0,05 ml -20 ° C

    (P1)

    Skoncentrowany wzorzec odniesienia i próbki oraz stężone rozcieńczalniki HRP Ab (25x)

    1 fiolka x 5 ml 2-8 ° C

    (P2)

    Skoncentrowany bufor do przemywania (25x)

    1 fiolka x 40 ml 2-8 ° C

    (A3)

    Substrate Reagent (TMB)

    5 x 0,125 ml -20 ° C w słabym miejscu

    (P3)

    Rozcieńczalniki substratu (TMB)

    1 fiolka x 15 ml 2-8 ° C w słabym miejscu

    (P4)

    Zatrzymaj rozwiązanie

    1 fiolka x 5 ml 2-8 ° C
    Plate Sealer, wielokrotnego użytku 5  
    Instrukcja obsługi 1  
    Certyfikat analizy 1  

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

     

    4. Sprzęt doświadczalny zapewniony przez siebie

    1. Czytnik mikropłytek (długość fali filtra 450 nm i 650 nm)

    2. Pipeta o wysokiej precyzji, probówka EP i końcówki jednorazowe

    3. Inkubator 37 ° C, woda podwójnie destylowana lub woda dejonizowana

    4. papier chłonny

     

    5 Uwaga dotycząca próbek do badania

    1. Jeśli próbka zostanie przebadana w ciągu 1 tygodnia od pobrania, może być przechowywana w temperaturze 2–8 ° C.Jeśli nie można go wykryć na czas, rozprowadź go zgodnie z ilością użytą raz i przechowuj zamrożony w temperaturze -20 ° C (test w ciągu 1 miesiąca) lub -80 ° C (test w ciągu 3 miesięcy), unikaj powtarzających się cykli zamrażania i rozmrażania .

    2. Zakres wykrywania zestawu różni się od zakresu stężeń próbki.Jeśli stężenie substancji testowej w próbce jest wyższe niż najwyższa wartość wzorca, przed pomiarem należy wykonać odpowiednie wielokrotne rozcieńczenie.

    3. Jeśli próbka lub ekstrakt komórkowy jest przygotowywany przy użyciu lizatu chemicznego, wprowadzenie pewnych substancji chemicznych może powodować odchylenia w pomiarach ELISA.

     

    6. Przygotowanie przed badaniem

    1. Wyjąć zestaw z lodówki 20 minut wcześniej i doprowadzić do temperatury pokojowej.Włącz czytnik mikropłytek 15 minut wcześniej, aby się rozgrzał.

    2. Przygotowanie rozcieńczalnika

    Rozcieńczyć stężony wzorzec i rozcieńczenie próbki lub stężone rozcieńczenie przeciwciała HRP wodą podwójnie destylowaną (1:25).

    3. Przygotowanie płynu myjącego

    Stężony roztwór do przemywania rozcieńczono podwójnie destylowaną wodą (1:25).

    Wskazówka:Stężony roztwór myjący wyjęty z lodówki może zawierać kryształki, co jest zjawiskiem normalnym.Można go podgrzać w łaźni wodnej o temperaturze 40 ° C, aby całkowicie rozpuścić kryształy, a następnie przygotować roztwór myjący (temperatura podgrzewania nie powinna przekraczać 50 ° C. Podczas stosowania temperatura roztworu myjącego powinna być równa temperaturze pokojowej).Użyj go tego samego dnia.

    4. Przygotowanie standardowe

    Umieścić wzorzec przy 1000 obr / min na 1 minutę, dodać 1,0 ml standardu i rozcieńczalnika do próbek do liofilizowanego standardu, zakręcić korek probówki, pozostawić na 10 minut i kilkakrotnie odwrócić do góry dnem.Po całkowitym rozpuszczeniu użyć delikatnie wymieszać pipetą (stężenie 16 ng / ml), a następnie wykonać wielokrotne rozcieńczenie (Uwaga: nie należy bezpośrednio wykonywać wielokrotnego rozcieńczania w studzience reakcyjnej).Zaleca się formułowanie następujących stężeń: 16, 8, 4, 2, 1, 0,5, 0,25ng / ml.Rozcieńczenie próbki zastosowano bezpośrednio jako ślepą studzienkę przy 0 ng / ml.

     

    Metoda podwójnego rozcieńczania

    Weź 7 probówek EP, dodaj 500 μl roztworu wzorcowego i roztworu próbki do każdej probówki, odpipetuj 500 μl z 16 ng / ml standardowego roztworu roboczego, dodaj do 500 μl probówki EP do rozcieńczania próbki i wymieszaj, aby uzyskać 8 ng / ml standardowy roztwór roboczy, wykonaj ten krok, a następnie zassaj i wymieszaj w kolejności.Jak pokazano niżej.

     

    Legenda o standardowym rozcieńczeniu (500 μl jako próbka)

    Zestaw REK ELISA 0

    Uwaga: Ostatnia rura jest bezpośrednio używana jako pusty otwór.

     

    5. Przygotowanie roztworu roboczego przeciwciała znakowanego HRP

    Odwirować probówkę z przeciwciałem przy niskiej prędkości przed eksperymentem, aby uniknąć pozostałości przeciwciała na ściance probówki i nasadce probówki. Oblicz ilość wymaganą do eksperymentu (obliczoną na 100 μl / dołek) przed eksperymentem.W rzeczywistym przygotowaniu należy przygotować 100-200 μl.15 minut przed użyciem rozcieńczyć przeciwciało znakowane HRP do roboczego stężenia rozcieńczalnikiem do przeciwciał (przeciwciało: rozcieńczalnik = 1: 250) i użyć tego samego dnia.

     

    6.Przygotowanie roztworu roboczego do barwienia (TMB)

    Oblicz ilość wymaganą do eksperymentu (obliczoną na 100 μl / dołek) przed eksperymentem.W rzeczywistym przygotowaniu należy przygotować 100-200 μl.15 minut przed użyciem rozcieńczyć chromogenny substrat TMB do stężenia roboczego (substrat: rozcieńczalnik = 1:20) za pomocą rozcieńczalnika do substratu i użyć tego samego dnia.

     

    7. metoda czyszczenia

    1. Automatyczna myjka do płytek: do każdego dołka dodaje się 350 µl roztworu do płukania, a interwały nastrzyku i ssania wynoszą 60 sekund.

    2. Umyć płytkę ręcznie: strząsnąć płyn z otworu, osuszyć na czystym grubym papierze chłonnym (lub suchą szmatką), dodać 350 μl roztworu myjącego do każdego otworu (można również użyć czystej butelki do mycia tutaj spłukać), namoczyć 2-3 minuty, odessać (nie dotykać ściany deski) lub strząsnąć płyn z deski i osuszyć na czystym grubym papierze chłonnym.

     

    8. Procedura operacyjna

    1. Dodaj roboczy roztwór standardu do pierwszych dwóch rzędów studzienek po kolei i dodaj obok siebie po dwa dołki każdego stężenia płynu roboczego, każdy dołek po 100 μl.Badaną próbkę dodaje się do innych dołków, po 100 μl na dołek.Jeśli stężenie próbki jest wyższe niż zakres wykrywania, należy ją rozcieńczyć roztworem wzorcowym i do rozcieńczania próbki i dodać.Przykryj mikropłytkę i inkubuj w 37 ° C przez 60 minut.

    Uwaga: Dodając próbkę, umieść próbkę na dnie płytki do mikromiareczkowania, nie dotykając ściany dołka i delikatnie wstrząśnij, aby uniknąć pęcherzyków powietrza.Dodaj próbkę w ciągu 10 minut.

    2. Mycie: Wyrzucić płyn, odwirować i osuszyć na czystym, grubym papierze chłonnym.Dodaj 350 μl roztworu do płukania do każdego dołka i moczyć przez 3 minuty.Odessać (nie dotykać ścianki płytki) lub strząsnąć płyn z płytki i osuszyć na czystym, grubym papierze chłonnym.Powtórz ten krok mycia 3 razy.

    3.Dodaj 100 μl roztworu roboczego przeciwciała HRP do każdego dołka, dobrze wymieszaj, przykryj płytkę do mikromiareczkowania i inkubuj w 37 ° C przez 30 minut.

    4. Mycie: Umyj płytkę 4 razy roztworem myjącym, kroki metody są takie same jak 2.

    5.Dodać 100 μl roztworu roboczego do barwienia substratu (TMB) do każdego dołka, przykryć płytkę do mikromiareczkowania i inkubować w 37 ° C przez 10 minut.

    Uwaga: W zależności od rzeczywistego rozwoju koloru można go skrócić lub wydłużyć, a czas wywoływania koloru mieści się w zakresie 5-30 minut.Gdy studnia wzorcowa wykazuje znaczny gradient, można ją zakończyć.

    6.Dodaj 50 μl roztworu zatrzymującego do każdego dołka, aby zatrzymać reakcję i pozostaw w temperaturze pokojowej na 1 minutę.

    Uwaga: Kolejność dodawania roztworu zatrzymującego powinna być taka sama, jak w przypadku roztworu substratu.Podczas dodawania cieczy nie dotykaj końcówki pipety, aby uniknąć zanieczyszczenia, które wpłynie na wyniki eksperymentu.

    7. Za pomocą czytnika mikropłytek zmierzyć gęstość optyczną (wartość OD450 / 650 nm) każdego dołka przy 450 nm (długość fali odniesienia 650 nm).

    Uwaga: Włącz wcześniej czytnik mikropłytek, rozgrzej przyrząd i skonfiguruj program wykrywania.

     

    9. Wynik oceny

    1. Obliczyć średnią wartość OD dla każdej grupy dołków.Jako wartość korygującą zastosowano średnią wartość OD każdego standardu pomniejszoną o wartość OD ze studzienki ślepej.Weź stężenie wzorca jako odciętą (X), a wartość OD jako rzędną (Y), narysuj krzywą wzorcową (wartość grupy ślepej można również usunąć podczas wykreślania).

    2. Zaleca się użycie profesjonalnego oprogramowania do tworzenia krzywych (takiego jak curve expert 1.3 lub ELISA Calc itp.), Aby narysować krzywą standardową zgodnie z określonymi wymaganiami eksperymentu.

    3. Jeśli wartość OD próbki jest wyższa niż górna granica krzywej wzorcowej, należy ją ponownie zmierzyć po odpowiednim rozcieńczeniu.

    4. dane typowe

    Ze względu na różne eksperymentalne warunki pracy (takie jak operator, technologia pipetowania, technologia mycia płytek, stabilne warunki itp.), Wartość OD krzywej standardowej może być inna.Zestaw próbny zapewnia dane i krzywe w zakresie 0,25-16 ng / ml w celach informacyjnych.Eksperymentator może wybrać punkty w tym zakresie, aby ustalić krzywą standardową.

     

    1)Zakres pomiaru 0,25-16ng / ml Standardowa linia krzywej

    Stężenie X (ng / ml) 16 8 4 2 1 0.5 0,25 0
    Y-OD450 / 650nm 1.613 1.350 0.955 0,609 0,342 0,195 0,134 0,069
    Kwota odzysku (ng / ml) 15.89 8.10 3,92 2.04 0,99 0.48 0,26 -
    Stopa odzysku% 99,3 101.2 98,0 102,0 99,0 96,0 104,0 -

     

    Zestaw REK ELISA 1Zestaw REK ELISA 2

     

     

     

    10. środki ostrożności

    1.Przechowywanie: Prosimy o rozsądne przechowywanie odczynników w zestawie, zgodnie z instrukcjami.Unikać wystawiania odczynników na działanie silnego światła podczas przechowywania i inkubacji.Wszystkie butelki z odczynnikami muszą być mocno dokręcone, aby zapobiec parowaniu i zanieczyszczeniu mikrobiologicznemu, w przeciwnym razie mogą wystąpić fałszywe wyniki.

    2.Płytka ELISA: W studzience właśnie otwartej płytki do mikromiareczkowania może znajdować się niewielka ilość substancji podobnej do wody.Jest to normalne i nie wpłynie na wyniki eksperymentalne.Listwę należy wyjąć i włożyć do zapasowej torby strunowej i przechowywać w zalecanej temperaturze, jeśli nie będzie używana w najbliższej przyszłości.

    3.Dodawanie próbki: Podczas dodawania próbek i dodawania tego samego odczynnika, zbyt długi odstęp między próbkami między pierwszym dołkiem a ostatnim dołkiem spowoduje różne czasy „preinkubacji”, co w oczywisty sposób wpłynie na dokładność i powtarzalność mierzonych wartości.Lepiej jest dodawać próbki w ciągu 10 minut.Zalecane jest ustawienie zduplikowanych otworów.

    4.Inkubacja: Aby zapobiec parowaniu próbki, płytkę do mikromiareczkowania należy podczas eksperymentu pokrywać.Następny krok należy wykonać jak najszybciej po umyciu płytki, aby płytka do mikromiareczkowania nie wyschła.Ścisłe przestrzeganie podanego czasu i temperatury inkubacji.

    5.Mycie:Ciecz myjącą pozostającą w studzienkach reakcyjnych podczas mycia należy osuszyć bibułą.Nie wkładaj bibuły filtracyjnej bezpośrednio do studni reakcyjnych w celu wchłonięcia wody.Przed odczytem usuń pozostały płyn i odciski palców ze spodu czytnika mikropłytek, aby uniknąć wpływu na odczyt czytnika mikropłytek.

    6.Przygotowanie odczynników: Ciecz może przywierać do ścianki probówki lub zakrętki butelki podczas transportu, dlatego należy użyć 1000 obr / min / środek oddzielający przez jedną minutę, aby osadzić ciecz przymocowaną do ścianki probówki lub zakrętki butelki na dnie probówki.Przed użyciem ostrożnie pipetować 4-5 razy pipetą, aby wymieszać roztwór.Wszystkie odczynniki należy przygotować dokładnie tak, jak wskazano w instrukcji.

    7.Kontrola czasu renderowania kolorów: Po dodaniu substratu należy regularnie obserwować zmianę koloru otworu reakcyjnego (np. Co pięć minut).Jeśli gradient jest oczywisty, należy wcześniej dodać roztwór kończący, aby zatrzymać reakcję, aby uniknąć zbyt głębokiego koloru i wpłynąć na odczyt czytnika enzymu.

    8.Podłoże: Proszę trzymać podłoże z dala od światła.Unikaj bezpośredniego wystawiania na silne światło podczas przechowywania i ogrzewania.

    9.Mieszanie: Dla wyników reakcji szczególnie ważne jest wystarczające i lekkie wymieszanie.Lepiej jest użyć mikrooscylatora o najniższej częstotliwości.Jeśli nie ma mikrooscylatora, możesz ręcznie postukać w ramkę płytki z etykietą enzymu, aby wymieszać przed reakcją.

    10.Nie należy mieszać różnych partii składników zestawu (z wyjątkiem detergentu i roztworu do zakańczania)

    11.O współczynniku odzysku próbki

    1) Ten zestaw wykorzystuje oznaczenie antygenowości rekombinowanej enterokinazy bydlęcej zamiast jej aktywności do oszacowania reszty białkowej.Dlatego wzorzec w zestawie wykorzystuje współczynnik ekstynkcji rekombinowanej enterokinazy bydlęcej (E1% 1cm = 20,01D, czyli gdy A280nm = 2,01 W tym czasie stężenie enterokinazy bydlęcej wynosiło 1 mg / ml) do obliczenia zawartości białka, oraz zastosowano wewnętrzną kontrolę jakości, aby zawartość wzorca była jak najbardziej dokładna i stała.

    2) Różne metody pomiaru i różnice w czystości produktu mogą prowadzić do niespójnej zawartości białka w enterokinazie bydlęcej z różnych źródeł i różnych partii produktów, a także powodować różnice we współczynnikach odzysku.Aby uniknąć wpływu powyższych czynników, zaleca się zastosowanie metody spektrofotometrycznej (A280nm) do oszacowania zawartości białka w próbce użytej do testu regeneracji, a następnie rozcieńczenie go do odpowiedniego stężenia dla testu odzysku, aby zminimalizować błąd odzyskiwania.

     

    11. Analiza problemów

    W przypadku problemów z wynikami eksperymentów, prosimy o terminowe fotografowanie wyników wywoływania koloru i właściwe przechowywanie nieużywanych listew i odczynników, a następnie kontakt z pomocą techniczną.Zapoznaj się również z poniższymi informacjami, aby dowiedzieć się, dlaczego.

    Opis problemu Possibla powoduje Środki zaradcze

     

    Standardowy gradient krzywej jest słaby

    Niedokładna aspiracja lub dawkowanie Sprawdzenie pipety i końcówek
    Nieprawidłowe rozcieńczenie wzorców Podczas rozpuszczania wzorca delikatnie obróć butelkę i delikatnie wymieszaj, aby całkowicie rozpuścić proszek.
    Niekompletne mycie Gwarantowany czas mycia i czasy mycia oraz ilość płynu dodawanego na studzienkę

     

     

     

    Słabe lub bezbarwne

    Czas inkubacji jest zbyt krótki Zagwarantuj wystarczający czas inkubacji
    Temperatura eksperymentalna jest nieprawidłowa Użyj zalecanej temperatury doświadczalnej
    Niewystarczająca lub brakująca objętość odczynnika Sprawdź proces pobierania i dozowania, aby upewnić się, że wszystkie odczynniki zostały dodane w odpowiedniej kolejności
    Rozcieńczenie jest nieprawidłowe

     

    Wartość odczytu jest niska

     

     

    Ustawienia czytnika płytek są nieprawidłowe

     

    Sprawdź długość fali i urządzenie filtrujące na czytniku mikropłytek
    Włącz wcześniej czytnik mikropłytek, aby się rozgrzać
    Duży współczynnik zmienności Nieprawidłowe dozowanie Sprawdź dozowanie

     

     

     

    Wysoka wartość tła

     

    Stężenie robocze przeciwciała wykrywającego jest zbyt wysokie

     

    Użyj zalecanego rozcieńczenia

     

    Niekompletne mycie płyt

    Przeczytaj uważnie kroki operacyjne ponownie, aby upewnić się, że każdy krok został całkowicie wyczyszczony;jeśli używasz automatycznej myjki płyt, sprawdź wszystkie wyloty pod kątem niedrożności;czy użyć roztworu myjącego dostarczonego z zestawem.
    Zanieczyszczony balsam Przygotuj świeży balsam

     

    Niska czułość

    Nieprawidłowo przechowywany zestaw ELISA Przechowuj powiązane odczynniki zgodnie z wymaganiami
    Nie zakończone przed przeczytaniem Roztwór zatrzymujący należy dodać do każdego dołka przed odczytaniem wartości OD

    Szczegóły kontaktu
    Shanghai Yaxin Biotechnology Co.,Ltd.

    Osoba kontaktowa: Miss Eland

    Wyślij zapytanie bezpośrednio do nas (0 / 3000)

    Najlepsze produkty
    Inne produkty